단위조작실험 BCA를 이용한 단백질정량분석

단위조작실험 BCA를 이용한 단백질정량분석 [단위조작실험] BCA를 이용한 단백질정량분석.ppt 목차 - 목적 - 실 험 이 론 - 준 비 사 항 - 실 험 방법 및 과정 -실 험 결 과 -고찰 본문 단백질 용액에 Cu2+ 이온을 반응시킨 후, Bicinchoninate(BCA)가 Cu+ 이온과 복합체를 형성하여 자색으로 발색하는 반응을 이용한 방법. 562 nm 에서의 흡광도를 측정. - Standard curve로부터 농도를 결정. 장점단점 반응 시약이 안정적 이다. 단일 시약을 사용하므로 방법이 간단 하다. 일반적인 버퍼물질에 간섭이 적다. 반응이 느리다. 실온에서 반응이 완전히 수행 되지 않는다. (항온조 사용) 농축된 단백질 샘플은 희석이 종종 필요 하다. 특정 파장의 빛이 화학물질에 의해 흡수되는 정도,즉 흡광도(absorbance)를 측정하는 측정기 일반적으로 빛이 물체에 닿으면 빛은 물체에 흡수될 수도 있고 통과 할 수도 있다. 이 때 흡수되는 빛이 그 농도에 따라 다르기 때문에 이러한 빛의흡수현상을 이용하여 시료용액 중 빛을 흡수하는 물질의 양을 정량하는 것이다 미지시료(lacase)의 흡광도 : 0.7163(1/20 희석) y = 0.0391χ + 0.0251 을 통해 농도χ를 구하면 17.68μg/ml (1/20 희석) - 원래 단백질 시료의 농도 20 X 17.68 = 353.6 μg/ml 본문내용 A)를 이용한 단백질 정량법의 원리를 이해 하고, 분광광도계를 통해 흡광도를 측정해 standard curve를 구하여 미지시료의 단백질 정량을 분석한다. * 1. BCA정량법 2. 분광 광도기 3. Beer-Lambert 법칙 * 단백질 정량 이란? 시료 내에 포함된 단백질의 양 또는, 농도를 구하는 과정 - 정확성과 간편성이 중요하게 여겨져 실험에 따라 여러 다양한 단백질 정량 방법을 사용 * * 실험이론BCA 정량법 단백질 용액에 Cu2+ 이온을 반응시킨 후, Bicinchoninate(BCA)가 Cu+ 이온과 복합체를 형성하여 자색으로 발색하는 반응을 이용한 방법. 562 nm 에서의 흡광도를 측정. - Standard curve로부터 농도를 결정. * * BCA 분석실험은 2개의 참고문헌 - http:// wiki.science.ru.nl - http://sciencefair.math.iit.edu/techniques/ spectrophotometer/ http://www.absoluteastronomy.com/topics/Beer- Lambert_law http:// www1.encyber.com http://oksure.org/archives/2314